Javascript está actualmente deshabilitado en su navegador.Varias características de este sitio no funcionarán mientras javascript esté deshabilitado.acceso abierto a la investigación científica y médicaRevistas científicas y médicas de acceso abierto revisadas por pares.Dove Medical Press es miembro de la OAI.Reimpresiones masivas para la industria farmacéutica.Ofrecemos beneficios reales a nuestros autores, incluido el procesamiento rápido de artículos.Registre sus detalles específicos y medicamentos específicos de interés y compararemos la información que proporcione con los artículos de nuestra extensa base de datos y le enviaremos copias en PDF por correo electrónico de inmediato.Volver a Revistas » Diseño, desarrollo y terapia de fármacos » Volumen 16Autores: Zhang M, Chen J, Wang Y, Kang G, Zhang Y, Han XPublicado el 15 de septiembre de 2022 Volumen 2022:16 Páginas 3117—3132DOI https://doi.org/10.2147/DDDT.S370473Revisión por revisión por pares anónimos únicosEditor que aprobó la publicación: Prof. Dr. Tin Wui WongMuqing Zhang,1,2,* Jian Chen,3,4,* Yanwei Wang,2 Guobin Kang,2 Yixin Zhang,3,4 Xue Han3,4 1Facultad de Medicina Integrativa, Universidad de Medicina China de Hebei, Shijiazhuang, República Popular de Porcelana;2Hospital afiliado, Universidad de Medicina China de Hebei, Shijiazhuang, República Popular de China;3Escuela de Farmacia, Universidad de Medicina China de Hebei, Shijiazhuang, República Popular de China;4Centro Internacional Conjunto de Investigación sobre Utilización de Recursos y Evaluación de la Calidad de la Medicina Tradicional China, Shijiazhuang, República Popular de China *Estos autores contribuyeron igualmente a este trabajo Correspondencia: Yixin Zhang;Xue Han, Tel +86 311 89926316, Fax +86 311 89926316, Correo electrónico [email protected];[email protected] Propósito: El enfoque de farmacología en red y el experimento de validación se realizaron para investigar los posibles mecanismos de Agrimonia pilosa Ledeb.(APL) extracto contra el infarto agudo de miocardio (IAM).Métodos: Los compuestos principales del extracto de APL se identificaron mediante análisis de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).Los objetivos de intersección de los compuestos activos y el AMI se determinaron mediante análisis de farmacología en red.Se estableció un modelo de ratón de IAM mediante inyección subcutánea de isoproterenol (Iso).Los ratones fueron tratados con extracto de APL por administración intragástrica.Evaluamos los efectos del extracto de APL en la electrocardiografía (ECG), los marcadores representativos cardíacos, los indicadores representativos del estrés oxidativo, los cambios patológicos y la vía de señalización de la fosfatidilinositol-3-quinasa (PI3K)/proteína quinasa B (Akt), así como la apoptosis. -indicadores relacionados en los ratones.Resultados: Se identificaron cinco compuestos candidatos en el extracto de APL.Los análisis de enriquecimiento indicaron que el extracto de APL podría ejercer efectos protectores del miocardio a través de la vía PI3K/Akt.La elevación del segmento ST y el aumento de la frecuencia cardíaca obviamente se revirtieron en los grupos de extracto de APL en comparación con el grupo Iso.También detectamos disminuciones significativas en lactato deshidrogenasa (LDH), creatina quinasa (CK), creatina quinasa MB (CK-MB), malondialdehído (MDA) y especies reactivas de oxígeno (ROS), así como un aumento significativo en las actividades de superóxido dismutasa. (SOD) después del tratamiento con extracto de APL.Además, el extracto de APL disminuyó notablemente el número de cardiomiocitos apoptóticos después del IAM.En los grupos de extracto de APL de ratones AMI, hubo un aumento en los niveles de expresión de p-PI3K, p-Akt y proteína de linfoma-2 de células B (Bcl-2), y hubo disminuciones en X asociado a Bcl-2 (Bax ), proteasas-3 específicas de aspartato de cisteinilo (caspasa-3) y niveles de expresión de la proteína caspasa-3 escindida, así como la relación Bax/Bcl-2.Conclusión: el extracto de APL tuvo un efecto protector contra el IAM inducido por Iso.El extracto de APL podría mejorar el IAM a través de acciones antioxidantes y antiapoptosis que pueden estar asociadas con la activación de la vía de señalización PI3K/Akt.Palabras clave: infarto agudo de miocardio, extracto de APL, isoproterenol, estrés oxidativo, apoptosis, PI3K/AktEl infarto agudo de miocardio (IAM) consiste en una necrosis miocárdica debida a isquemia aguda y persistente e hipoxia en las arterias coronarias, que puede causar insuficiencia cardíaca en casos graves1. El IAM es uno de los principales factores de muerte en pacientes con enfermedades cardiovasculares2. el tratamiento efectivo involucra la apertura oportuna de las arterias coronarias ocluidas para restaurar el flujo sanguíneo.3 Los principios de la terapia son remediar el miocardio moribundo, minimizar el tamaño del infarto, proteger la función cardíaca y manejar rápidamente todo tipo de complicaciones.El miocardio isquémico puede restablecerse a la perfusión normal, pero la reperfusión puede agravar la lesión si se realiza tarde después de la isquemia.4 Cuando el suministro de sangre de la arteria coronaria no puede satisfacer la demanda del miocardio, se produce una serie de cambios dañinos, como cambios ultraestructurales miocárdicos, células miocárdicas. desequilibrio metabólico, estrés oxidativo excesivo y necrosis de células miocárdicas.5 Los casos graves pueden poner en peligro la vida debido a arritmia o shock.El IAM inducido por isoproterenol (Iso) se ha convertido en uno de los modelos más característicos comúnmente utilizados para evaluar fármacos cardioprotectores6. Iso es un agonista de los receptores β que puede aumentar el consumo de oxígeno del miocardio al aumentar la contracción del miocardio y la frecuencia cardíaca, provocando sobrecarga cardíaca, deterioro de la microcirculación miocárdica e infarto de miocardio.La patogenia de los ratones con IAM inducido por Iso está relacionada con el estrés oxidativo y la apoptosis.7 La apoptosis es un proceso de muerte celular autónoma y ordenada que está controlado por genes e influenciado por cambios en el entorno interno.8 Muchas respuestas fisiológicas están asociadas con la apoptosis, como el desarrollo normal de un embrión, la renovación de las células y la muerte celular inducida por fármacos9. Y los trastornos de la apoptosis se asocian directa o indirectamente con la enfermedad cardiovascular10–13.El estrés oxidativo puede inducir tanto el daño oxidativo como la apoptosis, y la apoptosis moderada puede proteger a los cardiomiocitos del daño en condiciones estresantes.14–16 El estrés oxidativo excesivo puede promover la apoptosis e incluso provocar daño patológico.17 La fosfatidilinositol-3-quinasa (PI3K)/proteína La vía de señalización de la quinasa B (Akt) es una vía de transducción de señales intracelulares importante que tiene una función protectora en la apoptosis.18 Se ha demostrado que esta vía modula la apoptosis al regular la expresión de factores relacionados con la apoptosis.13Agrimonia pilosa Ledeb.El extracto de APL se obtiene de las partes aéreas de APL.APL es una planta medicinal que contiene una variedad de componentes químicos que se sabe que tienen efectos antitrombóticos, antioxidantes y anticancerígenos, así como la capacidad de eliminar especies reactivas de oxígeno y regular la producción de óxido nítrico.19 Se ha informado que los flavonoides de APL tienen una actividad significativa de eliminación de radicales libres, efectos protectores contra el daño oxidativo del ADN, actividad antioxidante y capacidad inhibidora de la aldosa-reductasa.20,21 Además, APL podría ayudar a mejorar el metabolismo de la glucosa y prevenir la apoptosis en el tejido cerebral en un área isquémica después de oclusión de la arteria cerebral media.22 Sin embargo, los efectos de los extractos acuosos de APL en ratones con IAM aún no han sido examinados.La farmacología en red tiene ventajas únicas en el proceso de descubrimiento sistemático de posibles ingredientes activos y objetivos en la medicina tradicional china.Puede permitir un análisis integral de la red de la acción de las drogas;revelar en profundidad los mecanismos de las drogas;verificar las características de múltiples componentes, múltiples objetivos y múltiples vías de la medicina tradicional china;y proporcionar nuevas estrategias y direcciones para la modernización de la investigación sobre la medicina tradicional china.23 Como una de esas medicinas, la APL tiene una amplia variedad de compuestos con efectos medicinales significativos en el sistema cardiovascular, que podrían ser muy valiosos para su explotación.24 Sin embargo, sus beneficios en AMI, incluidos sus efectos específicos y mecanismos potenciales, siguen siendo en gran parte inexplorados.Motivado por los resultados anteriores de la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), este estudio utiliza la farmacología en red y la validación experimental para dilucidar aún más los mecanismos potenciales del extracto de APL contra el AMI.Construimos una red de interacción fármaco-componente-objetivo para detectar posibles objetivos y vías del extracto de APL.Además, validamos los efectos y mecanismos protectores utilizando un modelo de ratón de AMI.El extracto de APL (Cat.#: HL-210302) se obtuvo de Xi'an Huilin Biotechnology Co., Ltd. (Shanxi, China), Iso se adquirió de Amylet Scientific Inc. (Michigan, EE. UU.) y el verapamilo (Ver) se obtenido de HeFeng Pharmaceutical Co., Ltd. (Shanghai, China).El pentobarbital sódico se adquirió de Shanghai Rongbai Biological Technology Co., Ltd. (Shanghai, China), la solución de paraformaldehído al 4 % se adquirió de Labgic Technology Co., Ltd. (Beijing, China) y la inyección de cloruro de sodio se adquirió de Shijiazhuang No. 4 Co. farmacéutica, Ltd. (Hebei, China).Shimadzu LC-20AD se adquirió de Shimadzu (Tokio, Japón).El acetonitrilo, el metanol y el ácido fórmico (puro cromatográfico) se obtuvieron de Fisher Chemical (Pittsburgh, PA, EE. UU.), mientras que el ácido elágico (≥98 %), (+)-catequina (≥98 %), quercetina (≥98 %) Las sustancias estándar , quercitrina (≥98%) y taxifolina (≥98%) se obtuvieron de Alfa Biotechnology Co., Ltd (Chengdu, China).El extracto de APL se disolvió con metanol (2 mg/mL) para el análisis cualitativo.Las condiciones cromatográficas fueron las siguientes: columna cromatográfica ZORBAX StableBond C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μm) (Agilent, EE. UU.), solución acuosa de ácido fórmico al 0,2 % como fase móvil A, solución de acetonitrilo como fase móvil B, caudal de 1 mL/min, temperatura de columna de 30 °C, detector PDA, longitud de onda de detección de 254 nm, volumen de inyección de 10 μL y tiempo de ejecución de 80 min.El programa de elución fue el siguiente: 0–50 min, 5–30% B;50–70 min, 30–55 % B;70–80 min, 55–95 % B.Los ingredientes activos fueron confirmados por HPLC en combinación con la literatura para proporcionar una referencia para estudios farmacológicos de red posteriores.Las proteínas objetivo de los ingredientes activos en el extracto de APL se recolectaron de la plataforma de análisis y base de datos de farmacología de sistemas de medicina tradicional china (TCMSP, https://old.tcmsp-e.com/), Swiss Target Prediction (http://swisstargetprediction. ch/) y las bases de datos de DrugBank (https://www.drugbank.ca/).25–27 La base de datos de Genecards (https://www.genecards.org/) se utilizó para buscar dianas relacionadas con el IAM.28 Homo sapiens se seleccionó para el análisis, y los nombres estándar de todos los objetivos proteicos se compararon a través de UniProt (https://www.uniprot.org/).29 Se buscaron intersecciones de componentes y objetivos de enfermedades y se introdujeron en Cytoscape 3.7.2 para construir mapasLuego, los objetivos que se intersectaban se importaron a String (https://string-db.org/) para construir una red PPI.30 Se utilizó Homo sapiens como criterio de filtrado, y la puntuación mínima de interacción se estipuló como alta confianza (0,700). .Los objetivos cruzados se importaron a Metascape (http://metascape.org/) para el análisis de la Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) y Gene Ontology (GO). visualización y análisis.Estos métodos se utilizaron en combinación con la literatura para seleccionar indicadores adecuados para la validación experimental en animales.Sesenta ratones Kunming (25 ± 5 g) se adquirieron de la Universidad Médica de Hebei (número de licencia de animales experimentales: SCXK (Ji) 2018–004) y se alojaron en un entorno estándar con agua y alimentos disponibles libremente.Todos los ratones se aclimataron durante al menos 1 semana y se mantuvieron en ayunas durante la noche antes de los experimentos.Todos los procesos experimentales se llevaron a cabo de acuerdo con las pautas éticas autorizadas por el Comité de Ética de la Universidad de Medicina China de Hebei (Número de certificado: DWLL2020073).Los animales se dividieron aleatoriamente en seis grupos: grupo de control (Con), grupo Iso (85 mg/kg), grupo Ver (2 mg/kg), grupo de extracto de APL en dosis baja (baja) (75 mg/kg), grupo APL grupo de extracto de dosis media (Medio) (150 mg/kg), y grupo de extracto de APL de dosis alta (Alto) (300 mg/kg).La dosis clínica máxima (12 g) se utilizó como dosis media, la tasa de extracción del extracto de APL fue de 10:1 y las dosis se calcularon de acuerdo con el método de normalización del área de superficie corporal.Después de la administración intragástrica del extracto de APL durante 7 días, se inyectó Iso por vía subcutánea a los ratones durante dos días consecutivos.Después del experimento, se observó el efecto protector del extracto de APL sobre la lesión miocárdica.Los ratones se anestesiaron con pentobarbital sódico (40 mg/kg) 24 h después de la última inyección de Iso y luego se fijaron en una placa de fijación.El ECG fue registrado por el Sistema de recolección de señales biológicas RM6240BD (Fábrica de instrumentos de Chengdu, Chengdu, China).Los niveles séricos de lactato deshidrogenasa (LDH, Cat.#: 210,101), creatina quinasa (CK, Cat.#: 201,101) y creatina quinasa MB (CK-MB, Cat.#: 201,101) se utilizaron como indicadores de evaluación de IAM .Se extrajo sangre de los globos oculares y se centrifugó a 3500 rpm durante 20 min a 4°C.Se recogió el sobrenadante.Los niveles de LDH, CK y CK-MB se determinaron utilizando kits comerciales de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Shenzhen Icubio Biomedical Technology Co. Ltd, Shenzhen, China).Los ratones experimentales fueron sacrificados después de realizar un ECG.Los tejidos del corazón se tomaron de todos los grupos experimentales, se enjuagaron inmediatamente con solución salina y se fijaron en una solución de paraformaldehído al 4%.Después de la fijación, los tejidos del corazón se incluyeron en parafina, se cortaron y se tiñeron con hematoxilina y eosina (H&E).Luego se realizó una evaluación histopatológica bajo un microscopio biológico.Las muestras de corazón se cortaron en secciones criogénicas de 5 μm de espesor que se tiñeron con solución de colorante DHE (Cat.#: D7008) y se incubaron durante 30 min a 37 °C en la oscuridad.Después de enjuagar la solución de colorante con PBS tres veces, se observaron los niveles de ROS y se fotografiaron bajo un microscopio de fluorescencia.Los sueros se analizaron para los niveles de malondialdehído (MDA, Cat.#: 200,425; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China) y superóxido dismutasa (SOD, Cat.#: 200,425; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China) actividades para evaluar el estrés oxidativo en ratones con IAM.La apoptosis miocárdica se analizó utilizando un kit de detección de apoptosis in situ (Servicebio, Wuhan, China).Las secciones de tejido miocárdico se enjuagaron con solución salina tamponada con fosfato, se inmovilizaron en una solución de paraformaldehído al 4 % y se incubaron en proteinasa K durante 10 min.Los núcleos apoptóticos se identificaron mediante tinción con TUNEL verde.Luego, cada muestra de miocardio se fotografió con un microscopio de fluorescencia a 200 × (Nikon, Japón).Los tejidos del corazón se lisaron con RIPA Lysis Buffer (Servicebio, Wuhan, China), y las proteínas totales se extrajeron y desnaturalizaron.La concentración de proteína se determinó usando un espectrofotómetro Ultra-micro (METTLER TOLEDO, Shanghái, China).Se tomaron muestras de proteína (50 µg) de cada grupo, se separaron mediante SDS-PAGE al 10 % a presión constante y se transfirieron a membranas de PVDF con flujo constante (Transfer Membranes, Shanghái, China).Las transferencias se sellaron con leche descremada al 5 % en un agitador a temperatura ambiente durante 1,5 h y luego se incubaron con anticuerpos primarios específicos contra la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH, n.° de catálogo: AF7021), PI3K (n.° de catálogo: AF6241), p-PI3K (n.° de cat.: AF3241), Akt (n.° de cat.: AF6261), p-Akt (n.° de cat.: AF0016), linfoma de células B-2 (Bcl-2, n.° de cat.: AF6139), Bcl -2-X asociado (Bax, n.º de catálogo: AF0120), proteasas-3 específicas de aspartato de cisteinilo (caspasa-3, n.º de catálogo: AF6311) y caspasa-3 escindida (n.º de catálogo: AF7022) (Affinity Biosciences , Jiangsu, China) a 1:2000 y 4°C durante la noche.La proteína específica se incubó con un anticuerpo secundario (Cat.#: S0001, Affinity Biosciences, Jiangsu, China) durante 50 minutos a temperatura ambiente después de lavar las membranas de PVDF tres veces con TBST.Las proteínas se detectaron utilizando una estación de trabajo de imagen inteligente (6000Plus, Guangzhou Biolight Biotechnology Co., Ltd, Guangzhou, China).Los datos adquiridos se expresaron como la media ± error estándar de la media (SEM) y se analizaron midiendo la significación estadística entre los grupos utilizando una prueba de análisis de varianza de una vía, seguida de una prueba de Tukey.Se utilizó SPSS versión 26 para analizar los datos y los valores de p < 0,05 se consideraron estadísticamente significativos.Los resultados del análisis HPLC (Figura 1A) mostraron que los ingredientes activos más críticos del extracto de APL fueron (+)-catequina, ácido elágico, taxifolina, quercitrina y quercetina (Figura 1B) con contenidos de 24,24 mg/g, 9,76 mg/ g, 11,03 mg/g, 9,84 mg/g y 0,78 mg/g, respectivamente.Se realizó un análisis de regresión lineal trazando la curva estándar del área del pico (Y) y la concentración (X) para la sustancia estándar, y los resultados mostraron una buena relación lineal entre el área del pico y la concentración (Tabla 1).Tabla 1 Ecuación de regresiónFigura 1 Extracto de APL.(A) Cromatogramas estándar.(B) Ingredientes químicamente activos.1. (+)-catequina, 2. ácido elágico, 3. taxifolina, 4. quercitrina, 5. quercetina.Figura 1 Extracto de APL.(A) Cromatogramas estándar.(B) Ingredientes químicamente activos.1. (+)-catequina, 2. ácido elágico, 3. taxifolina, 4. quercitrina, 5. quercetina.Con base en las bases de datos TCMSP, Swiss Target Prediction y DrugBank, se obtuvieron 152 objetivos para 5 ingredientes activos (Figura 2A).Se recopilaron y seleccionaron un total de 899 objetivos AMI de la base de datos Genecards.Combinando objetivos de extracto de APL con objetivos relacionados con AMI, se identificaron 93 objetivos comunes (Figura 2B).En base a esto, se construyó una red PPI de objetivos que se cruzan para los ingredientes activos del extracto de APL y AMI (Figura 2C).Además, el extracto de APL influyó principalmente en AMI a través de 20 objetivos comunes, incluidos AKT1, TNF y JUN.Figura 2 Selección de objetivos y construcción de redes.(A) Red de visualización de objetivo de compuesto de fármaco.(B) Diagrama de Venn de los objetivos de los compuestos activos del extracto de APL y AMI.(C) Red PPI de los objetivos de los compuestos activos del extracto de APL y AMI.El rectángulo verde representa el fármaco, el hexágono azul representa los componentes candidatos del extracto de APL para el tratamiento del IAM, el círculo morado representa los objetivos de los componentes activos del extracto de APL y los bordes entre los objetivos representan sus conexiones.Figura 2 Selección de objetivos y construcción de redes.(A) Red de visualización de objetivo de compuesto de fármaco.(B) Diagrama de Venn de los objetivos de los compuestos activos del extracto de APL y AMI.(C) Red PPI de los objetivos de los compuestos activos del extracto de APL y AMI.El rectángulo verde representa el fármaco, el hexágono azul representa los componentes candidatos del extracto de APL para el tratamiento del IAM, el círculo morado representa los objetivos de los componentes activos del extracto de APL y los bordes entre los objetivos representan sus conexiones.Se realizaron análisis de enriquecimiento GO y vía KEGG para identificar los mecanismos potenciales del extracto de APL para el tratamiento del IAM.Los 93 objetivos de intersección del extracto APL y AMI se enriquecieron en 179 vías KEGG, y las 20 vías principales se muestran en la Figura 3A.Los resultados mostraron que los mecanismos del extracto de APL para AMI involucran principalmente vías en cáncer, lípidos y aterosclerosis, estrés por cizallamiento de fluidos y aterosclerosis, AGE-RAGE y la vía de señalización PI3K-Akt.Figura 3 Análisis de vía KEGG y enriquecimiento GO.(A) Análisis de la ruta KEGG de objetivos candidatos de extracto de APL contra AMI.(B) términos GO de objetivos candidatos de extracto APL contra AMI.Figura 3 Análisis de vía KEGG y enriquecimiento GO.(A) Análisis de la ruta KEGG de objetivos candidatos de extracto de APL contra AMI.(B) términos GO de objetivos candidatos de extracto APL contra AMI.El análisis GO mostró que los 10 términos principales estaban notablemente enriquecidos en BP, CC y MF (Figura 3B).Los resultados demostraron que estos 93 objetivos estaban estrechamente relacionados con los siguientes términos.Los procesos biológicos se relacionaron principalmente con la respuesta a sustancias inorgánicas, la regulación positiva de la migración celular y la regulación positiva de la motilidad celular.Los componentes celulares estaban principalmente involucrados en la balsa de membrana, el microdominio de membrana y la caveola.Las funciones moleculares se centraron principalmente en la unión del receptor de citocinas, la unión específica del dominio de la proteína y la unión del factor de transcripción de unión al ADN.Además, se ha observado que la vía de señalización PI3K/Akt juega un papel fundamental en la patogenia del IAM y participa principalmente en el proceso apoptótico32. Por lo tanto, se realizaron experimentos con animales para investigar el mecanismo de la vía de señalización PI3K/Akt del IAM. .Los resultados del ECG mostraron que Iso provocó un aumento de la frecuencia cardíaca y elevación del segmento ST en comparación con el grupo Con (P < 0,01).Por el contrario, el pretratamiento con extracto de APL redujo notablemente el aumento de la frecuencia cardiaca y la elevación del segmento ST en comparación con el grupo Iso (P < 0,05 o P < 0,01).Además, en ratones con IAM inducido por Iso, altas dosis de extracto de APL dieron como resultado una frecuencia cardíaca y un segmento ST casi normales (Figura 4).Los datos sugirieron que el extracto de APL podría revertir los cambios del ECG.Figura 4 El extracto de APL disminuyó la frecuencia cardíaca (A) y el grado de elevación del segmento ST (B) en ratones con IAM inducido por Iso.Los valores se muestran como media ± SEM (n=10).Las diferencias significativas se presentan como **P < 0,01 en comparación con el grupo Con.#P < 0,05, ##P < 0,01, en comparación con el grupo Iso.Figura 4 El extracto de APL disminuyó la frecuencia cardíaca (A) y el grado de elevación del segmento ST (B) en ratones con IAM inducido por Iso.Los valores se muestran como media ± SEM (n=10).Las diferencias significativas se presentan como **P < 0,01 en comparación con el grupo Con.#P < 0,05, ##P < 0,01, en comparación con el grupo Iso.En el grupo Iso, los resultados del análisis bioquímico del suero sugirieron que los niveles de LDH, CK y CK-MB aumentaron de forma destacada en comparación con el grupo Con (P < 0,01).Las actividades de las enzimas marcadoras como LDH, CK y CK-MB en el suero presentaron una reducción significativa después de la administración del extracto de APL (P < 0,05 o P < 0,01).Los datos revelaron que el extracto de APL podría disminuir la actividad de las enzimas cardíacas en ratones AMI (Figura 5).Figura 5 El extracto de APL redujo las actividades de LDH (A), CK (B) y CK-MB (C) en ratones AMI inducidos por Iso.Los valores se muestran como media ± SEM (n=10).Las diferencias significativas se muestran como **P < 0,01 en comparación con el grupo Con.#P < 0,05, ##P < 0,01 en comparación con el grupo Iso.Figura 5 El extracto de APL redujo las actividades de LDH (A), CK (B) y CK-MB (C) en ratones AMI inducidos por Iso.Los valores se muestran como media ± SEM (n=10).Las diferencias significativas se muestran como **P < 0,01 en comparación con el grupo Con.#P < 0,05, ##P < 0,01 en comparación con el grupo Iso.En el grupo Con, las células miocárdicas eran morfológicamente normales, bien estructuradas y muy densas.No hubo edema evidente, lesión, necrosis, infiltración de células inflamatorias u otras manifestaciones.Las células miocárdicas estaban morfológicamente alteradas y la disposición desordenada en el grupo Iso.Se observó edema, necrosis celular e infiltración de fibras miocárdicas por factores celulares inflamatorios.Estos cambios patológicos confirmaron la inducción exitosa de AMI por Iso.Después de la administración de las diversas dosis de extracto de APL, el tejido miocárdico tenía una mejor morfología y había menos células infiltradas necróticas e inflamatorias.El efecto en el grupo Alto fue el más pronunciado, y las características patológicas mejoraron sustancialmente y fueron casi normales (Figura 6).Estos cambios sugirieron que el tratamiento de ratones con extracto de APL podría mejorar los patrones patológicos.Figura 6 El extracto de APL mitigó el AMI inducido por Iso en ratones.Efectos del extracto de APL sobre la histopatología cardíaca en ratones tratados con Iso.Observación de cambios histopatológicos en el corazón utilizando imágenes típicas de tinción H&E (aumento de 400 ×).La flecha roja indica edema, la flecha negra indica necrosis celular y la flecha amarilla indica infiltración inflamatoria.Figura 6 El extracto de APL mitigó el AMI inducido por Iso en ratones.Efectos del extracto de APL sobre la histopatología cardíaca en ratones tratados con Iso.Observación de cambios histopatológicos en el corazón utilizando imágenes típicas de tinción H&E (aumento de 400 ×).La flecha roja indica edema, la flecha negra indica necrosis celular y la flecha amarilla indica infiltración inflamatoria.Los datos mostraron que la actividad de SOD en los ratones tratados con Iso fue significativamente menor, y los niveles de ROS y MDA fueron significativamente más altos de lo normal (P < 0,01), lo que demuestra que los ratones se encontraban en un estado de estrés excesivo en el grupo Iso.El tratamiento de ratones AMI con extracto de APL aumentó sustancialmente las actividades de SOD y redujo el número de ROS y el nivel de MDA (P < 0,05 o P < 0,01).Encontramos que las dosis utilizadas en el grupo Medio y Alto tuvieron influencias favorables en la lesión por estrés oxidativo en ratones después de la ocurrencia del infarto (Figura 7).Figura 7 El extracto de APL mitigó el estrés oxidativo excesivo inducido por Iso en ratones.Se detectaron niveles de ROS (A y B) (aumento de 200 ×), SOD (C) y MDA (D) en ratones.Los valores se muestran como media ± SEM (n=10).Las diferencias significativas se muestran como **P < 0,01 en comparación con el grupo Con.#P < 0,05, ##P < 0,01 en comparación con el grupo Iso.Figura 7 El extracto de APL mitigó el estrés oxidativo excesivo inducido por Iso en ratones.Se detectaron niveles de ROS (A y B) (aumento de 200 ×), SOD (C) y MDA (D) en ratones.Los valores se muestran como media ± SEM (n=10).Las diferencias significativas se muestran como **P < 0,01 en comparación con el grupo Con.#P < 0,05, ##P < 0,01 en comparación con el grupo Iso.El ensayo TUNEL se aplicó para inspeccionar las células apoptóticas en tejidos miocárdicos después de un IAM y el efecto protector del extracto de APL.Los resultados mostraron que la apoptosis no fue detectable en el grupo Con.Sin embargo, la tasa de apoptosis en tejidos miocárdicos en el grupo Iso aumentó drásticamente en comparación con el grupo Con.Por el contrario, el número de células apoptóticas disminuyó sustancialmente con el tratamiento con extracto de APL, lo que demuestra que el extracto de APL era capaz de inhibir la apoptosis de las células del tejido miocárdico en ratones (Figura 8).Figura 8 El extracto de APL disminuyó la apoptosis de cardiomiocitos en ratones AMI.Imágenes típicas de tinción TUNEL inmunofluorescente (aumento 200 ×).Figura 8 El extracto de APL disminuyó la apoptosis de cardiomiocitos en ratones AMI.Imágenes típicas de tinción TUNEL inmunofluorescente (aumento 200 ×).Los resultados indicaron que Iso redujo la expresión de Bcl-2 (P < 0,05) y aumentó las expresiones de Bax, Bax/Bcl-2, caspasa-3 y cleaved-caspasa-3 (P < 0,05 o P < 0,01).Además, se encontró que el tratamiento con extracto de APL revierte significativamente estos cambios, regulando a la baja Bax, Bax/Bcl-2, caspasa-3 y caspasa-3 escindida mientras regula al alza Bcl-2 (P < 0.05 o P < 0.01).Estos datos indicaron que el extracto de APL podría inhibir la apoptosis regulando al alza los niveles de expresión de la proteína antiapoptótica y regulando a la baja los de la proteína antiapoptótica (Figura 9).Por lo tanto, el extracto de APL puede ejercer un efecto inhibidor significativo sobre la apoptosis del tejido miocárdico inducida por Iso en ratones.Figura 9 El extracto de APL inhibió la apoptosis de cardiomiocitos de ratones inducidos por Iso.Los niveles de expresión de las proteínas relacionadas con la apoptosis se analizaron mediante el ensayo de transferencia Western (A).Los niveles de Bcl-2 (B), Bax (C), Bax/Bcl-2 (D), caspasa-3 (E) y caspasa-3 escindida (F) se calcularon mediante análisis en escala de grises.Los valores se muestran como media ± SEM (n=3).Las diferencias significativas se muestran como *P < 0,05, **P < 0,01 en comparación con el grupo Con.#P < 0,05, ##P < 0,01 en comparación con el grupo Iso.Figura 9 El extracto de APL inhibió la apoptosis de cardiomiocitos de ratones inducidos por Iso.Los niveles de expresión de las proteínas relacionadas con la apoptosis se analizaron mediante el ensayo de transferencia Western (A).Los niveles de Bcl-2 (B), Bax (C), Bax/Bcl-2 (D), caspasa-3 (E) y caspasa-3 escindida (F) se calcularon mediante análisis en escala de grises.Los valores se muestran como media ± SEM (n=3).Las diferencias significativas se muestran como *P < 0,05, **P < 0,01 en comparación con el grupo Con.#P < 0,05, ##P < 0,01 en comparación con el grupo Iso.Para determinar si el extracto de APL activa la vía de señalización de PI3K/Akt, se inspeccionaron las expresiones de PI3K, p-PI3K, Akt y p-Akt.No hubo cambios destacados en los niveles de proteína PI3K y Akt entre los diferentes grupos según el análisis de transferencia Western.Los resultados indicaron que la expresión de p-PI3K y p-Akt disminuyó después del tratamiento con Iso en comparación con el grupo Con (P < 0,01).Por el contrario, en comparación con el grupo Iso, las expresiones de p-PI3K y p-Akt aumentaron con la terapia con extracto de APL (P < 0,05 o P < 0,01) (Figura 10).Estos datos implicaban que el extracto de APL probablemente ocurría regulando la vía de señalización de PI3K/Akt.Figura 10 El extracto de APL aumentó la señalización de PI3K/Akt de ratones inducidos con Iso.Los niveles de expresión de la proteína PI3K, p-PI3K, Akt y p-Akt se inspeccionaron mediante el ensayo de transferencia Western (A), y p-PI3K (B) y p-Akt (C) se calcularon mediante análisis densitométrico.Los valores se muestran como media ± SEM (n=3).Las diferencias significativas se presentan como **P < 0,01 en comparación con el grupo Con.#P < 0,05, ##P < 0,01 en comparación con el grupo Iso.Figura 10 El extracto de APL aumentó la señalización de PI3K/Akt de ratones inducidos con Iso.Los niveles de expresión de la proteína PI3K, p-PI3K, Akt y p-Akt se inspeccionaron mediante el ensayo de transferencia Western (A), y p-PI3K (B) y p-Akt (C) se calcularon mediante análisis densitométrico.Los valores se muestran como media ± SEM (n=3).Las diferencias significativas se presentan como **P < 0,01 en comparación con el grupo Con.#P < 0,05, ##P < 0,01 en comparación con el grupo Iso.Dado que el IAM a menudo causa daño miocárdico irreversible, tiene altas tasas de morbilidad y mortalidad33. Actualmente, la intervención coronaria percutánea directa y la terapia trombolítica son ampliamente utilizadas para tratar el IAM34. Sin embargo, estos tratamientos producen efectos secundarios como la lesión por reperfusión, por lo que es necesario para desarrollar productos naturales más nuevos y más seguros.El estrés oxidativo y la apoptosis son los factores clave en el IAM.Por lo tanto, los compuestos que exhiben actividades tanto antioxidantes como antiapoptosis son indispensables para desarrollar estrategias de tratamiento para el IAM.Los estudios clínicos han confirmado que ciertos compuestos naturales pueden proporcionar una cardioprotección significativa contra la lesión por I/R de pacientes con IAM, potencialmente a través de la supresión del estrés oxidativo y la apoptosis.35,36 Estudios previos han demostrado que el extracto de APL contra la lesión por reperfusión isquémica cerebral podría ser relevante con su potencial antioxidante.22 Aquí, los componentes activos del extracto de APL se identificaron primero y luego se realizó una farmacología de red para predecir los objetivos y las vías del extracto de APL para el tratamiento del IAM en este estudio.Finalmente, investigamos el efecto terapéutico del extracto de APL sobre el IAM y confirmamos que tiene un efecto protector del miocardio contra el IAM causado por Iso (Figura 11).Figura 11 Diagrama del probable mecanismo de protección del extracto de APL frente al IAM inducido por Iso.Figura 11 Diagrama del probable mecanismo de protección del extracto de APL frente al IAM inducido por Iso.Los análisis de enriquecimiento de KEGG y GO sugirieron que los mecanismos de acción del extracto de APL contra AMI podrían involucrar múltiples factores.En base a estos resultados, se examinó la vía PI3K/Akt mediante una evaluación adicional.La vía está estrechamente relacionada con el estrés oxidativo y la apoptosis en gran medida, lo que sugiere que el efecto del extracto de APL sobre el IAM está relacionado con la apoptosis, como lo confirmaron experimentos posteriores.37 Los resultados de los experimentos con animales demostraron que el extracto de APL podría proteger contra el IAM. causada por ISO.Los autores declaran no tener conflicto de intereses.IntJ Cardiol.Envejecimiento.J Pineal Res.Drogas Des Devel Ther.J Food Biochem.Braz J Med Biol Res.Drogas Des Devel Ther.J Etnofarmaco.Biogerontología.Ann Transl Med.Moléculas.Int J Mol Sci.Frente Farmacol.Nutrientes.J Cheminform.Ácidos Nucleicos Res.Ácidos Nucleicos Res.Nat Comun.Inflamofarmacología.J Food Biochem.Pruebas.Cell Biochem Biophys.Phytother Res.J Etnofarmaco.Marcadores Dis.J Mol Cell Cardiol.Eur J Pharmacol.Más uno.J Cell Physiol.Biochem Biophys Res Comun.J Int Med Res.Cell Physiol Biochem.Enfermedad de muerte celular.J Microbiol Immunol Infect.Cáncer Res.PeerJ.Soy J Physiol Corazón Circ Physiol.© 2022 El(los) autor(es).Este trabajo está publicado y autorizado por Dove Medical Press Limited.Los usos no comerciales del trabajo están permitidos sin ningún otro permiso de Dove Medical Press Limited, siempre que el trabajo se atribuya correctamente.Reservados todos los derechos.Registrado en Inglaterra y Gales.Si acepta nuestro uso de cookies y el contenido de nuestra Política de privacidad, haga clic en 'aceptar'.